Sustav RPA-CRISPR/Cas12a u ovoj studiji postiže brzo (30-40 min), ultra-osjetljivo (1 kopija/µL) HCMV otkrivanje ciljanjem na rano{6}}izraženi gen UL123, nadmašujući konvencionalne metode u testiranju kliničkih uzoraka. Ova inovacija omogućuje pravovremenu dijagnozu infekcija s niskim-virusnim-opterećenjem, posebno kod imunokompromitiranih pacijenata i naglašava izvedivost dijagnostike temeljene na CRISPR-za poboljšanje liječenja bolesti povezanih s HCMV-. Jednostavnost i učinkovitost testa naglašavaju njegov potencijal kao-alata za-brigu za-ograničene postavke.
Obrasci mjesta pojačanja RPA i odabir opreme.
(A) Dizajn RPA primera s obzirom na lokaciju fragmenata pojačanja. Strelice pokazuju položaje baza od početka do kraja amplificiranog fragmenta s P1-P6 početnicama.
(B) Slika agaroznog gela elektroforeze produkta RPA pojačanog sa 6 setova početnica HCMV.
(C) Provjera učinkovitosti pojačanja RPA kompleta različitih tvrtki. P: Primer, NC: negativna kontrola.
Rezultati su pokazali da je komplet AmpFuture pokazao najveću učinkovitost pojačanja.
Usporedba pozitivnih stopa MIRA-CRISPR/Cas12a, PCR - Fluorescent Probe Method i qPCR u kliničkim uzorcima.
Prikupili smo uzorke krvi i urina od 48 kliničkih bolesnika. Genomska DNA ekstrahirana je iz ovih uzoraka pomoću TIANamp Genomic DNA Kita, a rezultati detekcije UL122 analizirani su metodom PCR-fluorescentne sonde. Uspoređujući naše rezultate s kliničkim dijagnozama, naše su metode identificirale 6 pozitivnih uzoraka koji su bili negativni u kliničkim testovima.
