Staphylococcus hemolyticus je gram-pozitivna bakterija negativna koagulaza koja je vrlo česta u bolnicama. Posljednjih godina sve je veća zabrinutost zbog visokog rizika od infekcija pribavljenih u bolnici. Staphylococcus hemolyticus može dodatno izazvati infekcije kože, meningitis, peritonitis, pa čak i sepsu. Kašnjenja u kliničkoj dijagnozi mogu dovesti do pogoršanja zdravstvenih stanja, pa je brza dijagnoza stafilokoka hemolyticus ključna za precizno liječenje.
Istraživačka skupina profesora Ji Tuo-a iz Odjela za središnje laboratorij bolnice Lianyungang Druge narodne bolnice objavila je članak "Brzo i vizualno otkrivanje Staphylococcus Haemolyticus u kliničkim uzorcima s Mira-LFS" u časopisu "Analytica Chimica Acta", s faktorom utjecaja 6,2.
Pregled studije
U ovom istraživanju, grupa prof. Ji Tuo utvrdila je metodu za otkrivanje staphylolyticus hemolyticus od Mira-LFS-a na temelju MVAA gena, i koristila multi-enzimsku konstantnu temperaturnu tehnologiju brze nukleinske kiseline MIRA u kombinaciji s bočnim protokom test trake LFS za postizanje brzog patogena. Eksperiment je izveden na 37 stupnjeva, a rezultati su otkriveni u roku od 9 minuta s osjetljivošću na otkrivanje 0. 147 CFU/Reakcija. Metoda otkrivanja MIRA-LFS prikladna je za otkrivanje fiksne točke Staphylococcus hemolyticus u kliničkim uzorcima i ostvaruje metodu identifikacije Staphylococcus hemolyticus pomoću PoCT-a, što je od velike vrijednosti za brzu dijagnozu i liječenje bolesti u podmazanim područjima. Istraživačka skupina koristila je Mira-LFS, qPCR i tradicionalne metode bakterijske kulture za analizu 95 nasumičnih kliničkih uzoraka i potvrdila kliničku primjenjivost.
Metode istraživanja
Gore je prikazan shematski dijagram testa MIRA-LFS. U ovom su istraživanju korišteni komplet konstantnog temperature AMPFuture Biotech -a za brzo pojačanje (Koloidni testni testni trak) i test traka za otkrivanje nukleinske kiseline.
Duljina primera gena MVAA bila je 30-35 nukleotidi, a duljina produkta pojačala bila je 100-350 bp, a dizajnirano je ukupno 6 pari kandidatskih primera. GDNA standardnih stafilolitičkih sojeva Staphylococcus korištena je za MIRA analizu, pregledani su kandidatni primeri, a pojačani proizvodi su vizualizirani 2% agaroznom gel elektroforezom.
(Proizvodi za pojačavanje prikazuju se pomoću elektroforeze agaroznog gela)
Sonda je zatim dizajnirana prema slijedu prema naprijed (16 bp unatrag). 5 'Kraj sonde označen je s FITC -om, a kraj 3' označen je C3. 31- nukleotid položaja u sondi zamjenjuje se THF na udaljenosti od 30 bp od 5 'kraja i 15 bp od kraja 3'. 5 'kraj odabranog obrnutog temeljnih premaza označen je biotinom.
(Shematski dijagram cross-dimera i modifikacije kombinacija prajmera sonde)
Pored toga, optimizirani su reakcijski uvjeti za otkrivanje mira-lfs staphylococcus hemolyticus. Testovi se izvode na 37 stupnjeva od 4-12 min u intervalima od 2 min. Rezultati su prikazani u vremenu reakcije od 8 minuta, a testna linija je jasno vidljiva. Pored toga, test se izvodi od 22-52 stupnjeva u intervalima od 5 stupnjeva. 37-42 stupanj je najprikladnija temperatura za otkrivanje Mira-LFS. Stoga su optimalno vrijeme reakcije i temperatura MIRA-LFS metode za Staphylococcus hemolyticus bili 8 min, odnosno 37 stupnjeva. Zajedno s činjenicom da je konačni rezultat vizualizirao LFS u roku od 1 min, ukupno vrijeme otkrivanja je 9 min.
(Optimizacija vremena i temperature reakcije)
Eksperimentalni rezultati
1. Provjera osjetljivosti
Različite koncentracije genomske DNA (gDNA) dobivene iz serijskih razrjeđenja kultura Staphylococcus hemolytica (1 0^6-10^0 cfu/ml) testirane su na mira-lfs.
(Pozitivan signal u različitim koncentracijama)
Analiza vjerojatne jedinice regresije pokazala je da je 95% LOD određen testom MIRA-LFS bio je 0. 147CFU/Reaction.
(Ograničenje izračuna otkrivanja)
2. Provjera specifičnosti
Selektivnost detekcije MIRA-LFS određena je analizom 18 sojeva uobičajenih patogenih mikroorganizama i 15 sojeva kliničkog stafilokoka hemoliticus. Rezultati su pokazali da je test MIRA-LFS bio negativan na svih 18 drugih patogenih bakterija i pozitivan na 15 provjerenih kliničkih uzoraka Staphylococcus hemolyticus.
(Ispitano je 8 sojeva standardnih patogenih bakterija i 15 sojeva kliničkog hemolitičkog streptokoka)
MIRA-LFS test ima visoku selektivnost i pogodan je za probir Staphylococcus hemolyticus.
3. Stvarno testiranje uzorka
Ukupno 95 uzoraka nasumično je prikupljeno iz bolnice Lianyungang druge osobe, uključujući 35 uzoraka kože i mekog tkiva, 16 uzoraka urina, 14 uzoraka ispljuvaka i 30 uzoraka krvi.
(95 kliničkih uzoraka testirano je različitim metodama)
Rezultati su pokazali da je metoda otkrivanja bila 100% u skladu s qPCR metodom. Pored toga, u usporedbi sa zlatnim standardnim (GB/T4789. 11-2003), osjetljivost i specifičnost testa MIRA-LFS za identifikaciju infekcije Staphylococcus hemolytica bila je 100%, odnosno 98,73%. Ovi rezultati dodatno potvrđuju tehničku izvedivost metode u otkrivanju Staphylococcus hemolyticus u kliničkim uzorcima.
MIRA-LFS metoda koristi se za brzo otkrivanje Staphylococcus hemolyticus pomoću POCT-a, koji je učinkovit, točan, jednostavan i ekonomičan, što je korisno za brzu dijagnozu i odluke o liječenju.