Hej tamo! Kao dobavljač RNA izotermalnih kompleta za pojačavanje, često se postavljam ovo pitanje: "Može li se RNA izotermalni komplet za pojačavanje upotrijebiti za kvantitativnu analizu RNA?" Pa, zaronimo pravo u njega i razdvojimo ga.
Prvo, što je RNA izotermalno pojačanje? Za razliku od dobro poznate lančane reakcije polimeraze (PCR) koja treba više temperaturnih ciklusa, RNA izotermalno pojačanje događa se na konstantnoj temperaturi. To je prilično sjajna tehnologija koja je stekla popularnost posljednjih godina.
Jedna od glavnih prednosti korištenja RNA izotermalnog kompleta za pojačavanje je njegova jednostavnost. Ne treba vam fantastični termocikler sa svim tim temperaturama - mijenjajući postavke. To ga čini pristupačnijim, posebno za testiranje točke - OF - skrb ili u resursima - ograničene postavke. Ali ostaje veliko pitanje: Može li se koristiti za kvantitativnu analizu?
Započnimo gledajući osnovne načela kvantitativne analize RNA. Ukratko, želimo točno znati koliko je specifične molekule RNA prisutno u uzorku. To je ključno u mnogim poljima, poput virologije za mjerenje virusnog opterećenja ili u studijama ekspresije gena kako bi se shvatilo kako se geni reguliraju.
Tradicionalne metode za kvantitativnu RNA analizu, kao što je stvarno vrijeme PCR (qPCR), bili su zlatni standard. QPCR koristi fluorescentne boje ili sonde za otkrivanje količine pojačane DNK (koja je obrnuto - prepisana iz RNA) u stvarnom vremenu. Ciklus u kojem fluorescencija prelazi određeni prag (CT vrijednost) zatim se koristi za izračunavanje početne količine RNA u uzorku.
Sada, za RNA izotermalne setove za pojačavanje. Ovi setovi obično djeluju pomoću enzima koji mogu pojačati RNA na konstantnoj temperaturi. Na primjer,Mira RNA Izotermalni komplet za brzo pojačanje osnovno - IIjedan je od naših proizvoda koji koristi ovu tehnologiju. Može brzo pojačati ciljeve RNA, ali možemo li ih koristiti za kvantificiranje?
Odgovor je malo složeniji od jednostavnog da ili ne. S jedne strane, postoje neki izazovi. Za razliku od qPCR -a, koji ima dobro utvrđenu metodu za kvantitaciju na temelju vrijednosti CT, RNA izotermalno pojačanje nema izravan ekvivalent. Kinetika pojačanja u izotermalnim sustavima može biti složenija, a čimbenici poput početnih reakcijskih uvjeti, aktivnost enzima i dostupnost supstrata mogu imati veći utjecaj na brzinu pojačanja.
Međutim, to ne znači da je to nemoguće. Neki su istraživači smislili kreativne načine kako bi RNA izotermalno pojačalo prikladno za kvantitativnu analizu. Jedan pristup je korištenje unutarnjih standarda. Kao i u qPCR -u, u svoj uzorak možete dodati poznatu količinu kontrolne molekule RNA. Usporedbom pojačanja ciljne RNA s kontrolnom RNA, možete dobiti procjenu ciljane količine RNA.
Drugi način je korištenje metoda otkrivanja utemeljenih na fluorescenciji u kombinaciji s RNA izotermalnom pojačanjem. Na primjer, neki od naših kompleta, poputMira RNA Izotermalno brzo pojačanje komplet nukleinske kiseline Test Strip, može se izmijeniti tako da ugradi fluorescentne sonde. Mjerenjem intenziteta fluorescencije tijekom vremena možete pratiti postupak pojačanja i potencijalno ga koristiti za kvantitaciju.
Razgovarajmo i o prednostima korištenja naših RNA izotermalnih kompleta za pojačavanje za kvantitativnu analizu u usporedbi s tradicionalnim metodama. Kao što sam već spomenuo, jednostavnost i brzina su ogromni plusevi. Pomoću naših kompleta možete dobiti rezultate u mnogo kraćem vremenu u usporedbi s qPCR -om, koji obično traje sat ili više. To je posebno važno u situacijama kada je brza dijagnoza presudna, poput izbijanja zaraznih bolesti.
Štoviše, naši se setovi vrlo specifični. Dizajnirani su tako da ciljaju samo RNA sekvence od interesa, smanjujući šanse za lažno pozitivne rezultate. Ova je specifičnost ključna za točnu kvantitativnu analizu, jer želite biti sigurni da mjerite samo RNA koju vas zanima.
Sada, dotakvimo se nekih praktičnih aspekata. Ako razmišljate o korištenju naših RNA izotermalnih kompleta za pojačavanje za kvantitativnu analizu, treba imati na umu nekoliko stvari. Prvo, morate optimizirati reakcijske uvjete. To uključuje stvari poput koncentracije enzima, prajmera i drugih reagensa. Dobro - optimizirana reakcija dat će vam više ponovljivih rezultata, što je ključno za točnu kvantitaciju.
Drugo, morate potvrditi svoju kvantitativnu metodu. To znači pokretanje više replika poznatih uzoraka i usporedbu rezultata s referentnom metodom, poput qPCR. Radeći to, možete utvrditi točnost i preciznost svoje kvantitativne analize pomoću naših RNA izotermalnih kompleta za pojačavanje.
Imamo i još jedan sjajan proizvod,Mira DNA Izotermalni komplet za brzo pojačavanje. Iako je to za pojačavanje DNK, principi kvantitativne analize mogu na neki način biti slični. Može se koristiti u kombinaciji s RNA analizom u nekim slučajevima, na primjer, kada želite proučiti odnos između razine DNK i RNA u stanici.
Zaključno, iako se RNA izotermalni kompleti za pojačavanje suočavaju s nekim izazovima kada je u pitanju kvantitativna analiza RNA, to je moguće s pravim pristupom. Naša tvrtka posvećena je pružanju kompleta visoke kvalitete i podržavanju naših kupaca u istraživanju potencijala ovih tehnologija za kvantitativne primjene.
Ako ste zainteresirani da saznate više o našim RNA izotermalnim kompletima za pojačavanje ili želite razgovarati o tome kako se mogu koristiti za vaše specifične potrebe za kvantitativnom analizom, voljeli bismo čuti od vas. Samo se obratite nama kako bismo započeli razgovor o nabavi i kako možemo zajedno raditi na ispunjavanju vaših istraživačkih ciljeva.
Reference
- Notomi, T., Okayama, H., Masubuchi, H., Yonekawa, T., Watanabe, K., Amino, N., & Hase, T. (2000). Petak - posredovano izotermalno pojačanje DNK. Istraživanje nukleinskih kiselina, 28 (12), E63 - E63.
- Gootenberg, JS, Abudayyeh, Oo, Lee, JW, Essletzbichler, P., Dy, A., Joung, J., ... & Zhang, F. (2018). Otkrivanje nukleinske kiseline s CRISPR - CAS13A/C2C2. Science, 360 (6387), 439 - 444.